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层流手术室分为垂直层流式和水平层流式两种。垂直层流式（Supply air ceiling for operating theatre）过滤器装在手术病床的正上方，气流垂直吹送，回风口设在墙面的四角，确保手术台洁净度达标，一般多采用垂直层流式效果较好。层流手术室的空气压力根据其不同区域（如手术间、无菌准备间、刷手间、间和周围干净区域等）洁净度不同要求而不同。正是采用的这种垂直的层流式，在手术室内的顶部还设置了一个吊塔式的负压吸引系统，将医生在手术时呼出的空气吸出塔外，进一步保证手术室的洁净和无菌，降低手术的率。
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专人维护，定期监测 整个空调系统应有专人负责，定期检查、维修、保养，对过滤网及时清洗。每个月对手术室空气、手术室人员的手及手术室无菌物品表面采样进行细菌培养，检查净化效果，发现不合格及时找出原因，并采取有效措施。
回风口及地面的清洁维护 每日早晨用湿布抹擦所有物体表面及回风口，每周彻底清洗回风口、天花板的回风纱窗。地面每日用的清洁剂拖擦，再用清水拖净，如有血迹及其它污染物污染时，应及时用消毒剂擦洗。搬运重物时应在地面上垫其它物品，以免在地面上划痕。
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（1）进入手术室必须更换洗手衣裤、鞋帽。（2）严格控制入室人数。（3）尽量减少层流手术室的开门次数与时间（更不可将门打开不关），维持'相对密闭状态'，以防外来污染的进入。每日手术结束后，有清洁工用标志明确、分区使用的卫生洁具将手术间打扫干净，关闭电动门，经1h层流后关闭空调系统。（4）手术前用酒精擦拭室内物品、程仪器、设备等。（5）术后及时、彻底清洁室内所有物品、墙壁及地面。（6）妇女不可用粉、头发喷雾剂和指甲油之类的化妆品，以减少污染来源。